ABSTRACT
Sensitive biological responses to environmental contaminants are useful as early warning signals to predict the damages by long-term exposure. Protocols standardization to quantify biochemical parameters in different fish species is required to validate its use as biomarkers. Comparative studies from different fish species and its interpretation are a challenge for the validation of its use as general biomarkers, representative of environmental impact. In this study, the protocol for liver cytochrome P450 (CYP) analysis from the native Brazilian fish Ancistrus multispinis was established. The microsome contamination by hemoglobin during the analysis of CYP in liver was detected, leading to misinterpretation of the results. The spectrophotometric method for CYP analysis was adapted in order to diminish the hemoglobin interference. Additionally, the western blotting method for CYP1A analysis was tested with success for this fish species.
Respostas biológicas sensíveis aos contaminantes ambientais são úteis para prever efeitos prejudiciais devido a exposições crônicas. Padronização de protocolos para quantificar parâmetros bioquímicos em diferentes espécies de peixes é necessária para validar o uso como biomarcador. Estudos comparativos de diferentes espécies de peixe e sua interpretação são um avanço para a validação do uso de biomarcadores gerais, representativos do impacto ambiental. Neste estudo o protocolo para a análise do citocromo P450 (CYP) do peixe nativo brasileiro Ancistrus multispinis foi estabelecido. Cyp é um biomarcador de exposição principalmente de hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HAP), bifenilas policloradas (PCB) e dioxinas. A contaminação do microssomo pela hemoglobina durante as análises do CYP no fígado foi detectada, levando a uma interpretação errônea dos resultados. O método espectrofotométrico para análise do CYP foi adaptado para diminuir a interferência da hemoglobina. Além disso, o método de western blotting para análise de CYP1A foi testado com sucesso para essa espécie de peixe.
ABSTRACT
Mexilhões são periodicamente submetidos a condições de hipóxia seguido de normóxia, como resultado das oscilações nos níveis de maré. Tais condições podem causar um aumento na produção de espécies reativas de oxigenio (EROs) nos tecidos, devido a um aumento no fluxo de oxigênio e de equivalentes redutores. Para proteger as células contra as EROs, os organismos possuem enzimas antioxidantes tais como a superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx), assim como o tripeptídeo glutationa (GSH). Neste trabalho, estas defesas antioxidantes foram avaliadas em glândulas digestivas de mexilhões Perna perna expostos ao ar por 4 horas seguido de re-submersão em água do mar por 30 minutos e constantemente submersos por 4,5 horas. Nenhuma diferença foi observada nas atividades da CAT e GPx, assim como nos níveis de GSH total. Mexilhões expostos ao ar tiveram atividade da SOD significativamente maior, possivelmente relacionado a um mecanismo de defesa preparativo contra o estresse oxidativo durante a reoxigenação.